貨源介紹
MM.1S人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的母細(xì)胞株MM.1是從一位對類固醇療法產(chǎn)生抗藥性的多發(fā)性骨髓瘤患者的外周血中建立的。MM.1R對地塞米松耐藥。近緣細(xì)胞系MM.1S也是從MM.1中分離出來的，但對地塞米松敏感。該細(xì)胞復(fù)蘇后需要兩周左右才能恢復(fù)正常生長。
細(xì)胞特性
1）來源：人、女性、外周血
2）形態(tài)：成淋巴瘤細(xì)胞，懸浮和輕微的貼壁
3）含量：>1x10^6
4）污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性
5）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
6）用途：僅供科研使用。
運(yùn)輸和保存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
?。?）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
?。?）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的處理
1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）懸浮細(xì)胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞在1000RPM條件下離心5min，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基）。
4）半貼細(xì)胞（或貼壁不牢細(xì)胞）：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的情況，若細(xì)胞密度在70%以下，客戶需收集T25瓶中的懸浮的細(xì)胞離心后用完全培養(yǎng)基重懸后打回到原來的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，若細(xì)胞生長到70%-90%可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代，在傳代過程中，需要收集T25瓶中懸浮的細(xì)胞離心后回收。
5）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基,優(yōu)質(zhì)胎牛血清10%，P/S青霉素-鏈霉素1%
2）注意事項(xiàng)：
a.該細(xì)胞同時(shí)存在懸浮生長和輕微的貼壁狀態(tài)。
b.該細(xì)胞復(fù)蘇后需培養(yǎng)2周左右時(shí)間，才能恢復(fù)正常生長狀態(tài)。
c.細(xì)胞密度不可過高，在細(xì)胞匯合前進(jìn)行傳代，否則容易成團(tuán)。
3）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
參考傳代比例:1:3-1:6，參考換液頻率:2-3天
4）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度和拍照。
2細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)70%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
該細(xì)胞為懸浮和輕微的貼壁細(xì)胞，傳代可以參考以下方法：
1）懸浮狀態(tài)下生長的細(xì)胞，可以通過向培養(yǎng)瓶中添加完全培養(yǎng)基來維持細(xì)胞的生長狀態(tài)，一般情況下細(xì)胞密度維持在1×105~1×10^6個(gè)/mL（不同細(xì)胞對密度要求不同，具體可以參考細(xì)胞說明書）可以維持細(xì)胞的正常生長。懸浮細(xì)胞的收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中。棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)．貼壁細(xì)胞的的消化，pbs清洗1-2次由于細(xì)胞貼壁不牢，pbs清洗過程中會有細(xì)胞脫落，所以pbs清洗液需要收集到離心管中。清洗后的貼壁細(xì)胞按正常的貼壁細(xì)胞處理。加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%血清的培養(yǎng)基來終止消化。
3）將收集到的懸浮細(xì)胞，消化下貼壁細(xì)胞和pbs清洗液中的細(xì)胞以1000rpm,5min離心重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3細(xì)胞凍存：收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
![[!--sitename--]](/d/file/p/2023/11-09/161cf394eaca919ff7437c859d926fa4.png)
